细胞常温运输操作步骤和细则

通常，冻存的细胞需干冰或液氮运输，可确保较高的细胞活力。但其运输手续复杂，运输成本高，风险较大。一旦物流延误，干冰或液氮大量挥发，将会影响细胞活力。为此，我们做了大量测试。结果显示：悬浮生长的细胞，“使用15ml离心管为载体，灌满完培常温防震运输”，可在降低运输成本，提高劳动效率，确保良好的细胞活力。具体操作步骤如下（本操作适合悬浮生长的细胞）：1、【准备材料】37度预热适合细胞生长的30ml完全培养基，准备2个15ml无菌离心管并标记A和B，准备1ml加长无菌枪头及适配的移液器等。

2、【灌装培养基】预热的完培外部表明消毒后，无菌环境下分别取11ml完培到15ml离心管A和B（见图1）。

3、【灌装细胞和补完培】预先观察细胞和活力测定，确保状态良好的，活力大于90%。

（图2，NK92细胞活力测定，绿色荧光染色的为死亡细胞）。

a、【准备】从37度培养箱，取出悬浮细胞的T25瓶（悬浮生长的细胞垂直培养，减少换液频率，增加细胞密度，提高细胞活力。），垂直放在无菌环境下。

b、【灌装细胞】开T25瓶盖后，用适配1ml加长的枪头移液器，分别吸取5ml细胞团或细胞悬液，沿着15ml离心管内壁缓慢添加。操作要领：吸取时，不要吹打散；添加时，也不要吹打或者震荡。c、灌装完成后，分别盖好15ml离心管盖，拧紧。

d、【补完培】原T25瓶内补5ml完培，拧紧瓶盖（通常透气），将T25瓶垂直放置（盖朝上，见图3）培养箱正常培养。

4、【密封与无菌包装】无菌环境下，将15ml离心管AB，分别使用封口膜密封管口和管盖（见图4），再套上无菌的密封袋（可选用细胞培养板外包装袋），封口膜扎紧扣放入传递窗（关闭紫外灯）。

5、将包装有AB管细胞的密封袋，用塑料密封袋密封（图5）。再一起放入防震泡沫袋，并用皮筋扎紧，放入泡沫盒，密封后常温运输（图6）。

总结和细则：悬浮生长的细胞灌满完培，以常温防震运输，细胞活力更高，更便捷实惠。灌装细胞，操作时，避免吹打细胞团，操作缓慢轻柔，减少剪切力对细胞活力的影响。细胞悬液与新鲜完培的比例为约2:1，即：11ml的完培中加入5ml细胞悬液或细胞团。

悬浮生长的细胞常温运输，收到细胞后该如何操作呢？私信。