细胞转染效率和病毒滴度如何提高

细胞转染效率和病毒滴度如何提高？

---实验操作和分析报告分享

一、细胞转染测试试剂材料和条件：a、目的细胞：Mono-293TT-Gao细胞（单克隆高转染高滴度的人胚肾细胞）。

b、目的质粒：SC-mKate2-Puro-Vector质粒，分别 1.5ug和3ug；浓度大于500ng/ul。

c、辅助质粒：PLP1质粒、PLP2 质粒 和PVSV-G质粒，分别0.5ug和1ug。

d、转染体系：6孔板单孔+高效多能细胞转染试剂TransVB-Hi。

二、细胞转染操作步骤：细胞转染详细操作步骤，请点击跳转细胞转染慢病毒包装操作步骤。

三、转染测试结果和数据解读（图2和3）：A、细胞转染效率曲线

B、细胞转染时间间隔照片（图4、5和6）：

C、细胞转染数据数据解读：

在细胞数目和状态、细胞转染体系（H-DMEM+4质粒转染体系）、操作方法（滴加）和转染试剂剂量（10ul TransVB-Hi转染试剂/单孔)）一致的前提下，分别按照目的质粒1.5ug和3ug采用4质粒体系转染Mono-293TT-Gao细胞，转染6h后换液。

a、转染细胞6h（曲线坐标轴上的第一个时间），InCucyte细胞成像可见：两种质粒转染体系均有非常少的红光荧光表达，表明细胞转染成功，可换液。

b、细胞转染24h（曲线坐标轴上的第二个时间），InCucyte细胞成像可见：两种质粒转染体系均有较多的红光荧光表达（均大于50K/Well），两种体系转染效率差异不明显。

c、细胞转染24h+6h（曲线坐标轴上的第三个时间），InCucyte细胞成像可见：两种质粒体系均有大量的红光荧光表达（均大于125K/Well），且1.5ug质粒转染体系表达红色荧光的细胞数目为3ug质粒转染体系的2倍以上，细胞转染效率差异非常明显。

d、细胞转染48h（曲线坐标轴上的第四个时间），InCucyte细胞成像可见：两种质粒转染体系均有大量的红光荧光表达（大于100K/Well），且1.5ug质粒转染体系表达红色荧光的细胞数目为3ug质粒转染体系的1.5倍以上，细胞转染效率差异明显。但整体荧光数目受到未感染细胞及其增殖的遮盖，成像可见的表达红色荧光的细胞数目均减少。

e、细胞转染72h（曲线坐标轴上的第五个时间），InCucyte细胞成像可见：两种质粒转染体系均有大量的红光荧光表达（40-100K/Well），且1.5ug质粒转染体系表达红色荧光数目为3ug质粒转染体系的1倍左右，细胞转染效率差异明显。但整体荧光数目受到未感染细胞及其增殖的遮盖，成像可见的表达红色荧光的细胞数目均减少。

综上可见：在细胞数目和状态、细胞转染体系、操作方法和转染试剂剂量一样的前提下，1.5ug质粒转染体系比3ug质粒转染体系转染效率高2倍以上。产生的慢病毒，同等剂量下分别感染小鼠心肌细胞(HL-1)和人白血病T淋巴细胞(J.RT3-T3.5-Jurkat)，1.5ug质粒转染体系产生的慢病毒感染效率更高。

总之，在稳定的细胞转染体系内，降低目的质粒的总质量，可提高细胞转染效率，从而提高慢病毒的滴度。